Аннотация
Для сохранения качества жизни и снижения затрат на здравоохранение важное значение имеют стратегии профилактики, а не лечения хронических заболеваний. Например, таких как остеопороз.
Чай является богатым источником флавоноидов, которые могут быть полезны для здоровья костей.
Из исследований на людях получены убедительные доказательства того, что привычное потребление чая положительно связано с более высокой минеральной плотностью костей (МПК), в то время как связь с риском переломов менее ясна. Исследования переломов показывают снижение или отсутствие различий при употреблении чая в патологических переломах, обусловленных повышенной ломкостью костей.
Существуют ключевые вопросы, на которые необходимо ответить в будущих исследованиях, чтобы выяснить, поддерживает ли более высокое потребление чая не только здоровую МПК, но и снижает ли риск патологических переломов. И, если последняя связь, как показано, существует, то могут быть разработаны и выполнены исследования для выяснения ее механизмов.
В этом обзоре обсуждаются результаты эпидемиологических исследований, а также потенциальные механизмы, с помощью которых флавоноиды в чае могут опосредовать свой эффект, и выявляются ключевые пробелы в знаниях в этой области исследований.
Остеопороз
По оценкам, во всем мире у 1 из 5 мужчин и 1 из 3 женщин в течение жизни случается патологический перелом. Патологические переломы происходят каждые 3 секунды. Смертность связана со всеми типами остеопоротических переломов, но самый высокий риск смерти от патологических переломов приходится на мужчин и женщин в возрасте 60-69 лет.
Диетические подходы представляют собой потенциальную профилактическую стратегию, которая поддерживает здоровье костей. В то время как кальций и витамин D были тщательно изучены, другие продукты питания и пищевые компоненты, такие как чай и его флавоноиды, также представляют интерес с точки зрения их потенциала укреплять и поддерживать здоровье костей на протяжении всей жизни человека.
В этом обзоре будут освещены эпидемиологические данные, подтверждающие связь между потреблением чая и здоровьем костей, обсуждены потенциальные механизмы, с помощью которых флавоноиды в чае могут опосредовать этот эффект и выявлены ключевые пробелы в знаниях в этой области исследований. Более того, некоторые эпидемиологические исследования показывают, что регулярное употребление чая связано с более высокой МПК и снижением риска патологических переломов при регулярном употреблении чая.
Чай и минеральная плотность костей (МПК)
Результаты многих, перекрестных, контрольных и проспективных исследований выявили связь между потреблением чая и улучшением здоровья костей в различных популяциях по всему миру. Исследования проводились в Северной Америке, Европе, Австралии и Азии. Наиболее тщательно изучены были женщины в постменопаузе, причем некоторые исследования также включали мужчин в самых разных возрастах или женщин в пременопаузе. На сегодняшний день большинство этих исследований, изучающих связь между потреблением чая и здоровьем костей, используют измерение минеральной плотности костной ткани (МПК), используя двойную рентгеновскую абсорбциометрию, в одном или нескольких скелетных участках, обычно в бедре и/или позвоночнике как меру здоровья костей и суррогатный показатель риска патологического перелома.
Кросс-секционные исследования
Кросс-секционные исследования выявили положительные корреляции между привычным потреблением чая и МПК у женщин в постменопаузе. Исследование 62 женщин в постменопаузе в Канаде измерило МПК в поясничном отделе позвоночника и шейке бедра и обнаружило положительную корреляцию между потреблением чая и МПК в обоих местах.
Аналогично, исследование, проведенное в Англии у 1256 женщин в постменопаузе, изучило взаимосвязь между потреблением чая, которое учитывалось самостоятельно, (как 1-3, 4-6 или >6 чашек в день, типы чая не определены) и МПК в трех местах: поясничный отдел позвоночника, большой вертел и треугольник Уорда. Была выявлена положительная связь между потреблением чая и МПК. Все женщины, употреблявшие чай, имели примерно на 5% большую МПК во всех трех местах. Не было никакой разницы в МПК между людьми, которые потребляли 1-3 чашки по сравнению с 4-мя или более чашками в день. Потребители чая также были классифицированы по тому, потребляли ли они молоко в своем чае, поскольку молоко обеспечивает хороший источник кальция (приблизительно 300 мг кальция на порцию или 25% от рекомендуемого потребления для женщин старше 50 лет). Однако молоко, добавленное к чаю, никак не повлияло на эти отношения.
Еще одна положительная корреляция между чаем и МПК была выявлена у женщин в постменопаузе (n=680), которые обычно употребляли чай улун. Потребление по крайней мере 1 чашки чая улун в день было связано с более высоким уровнем МПК в большом вертеле и треугольнике Уорда.
Эти результаты были также отражены в исследовании женщин в постменопаузе в Японии (n=632). Женщины, употреблявшие зеленый чай ≥5 дней в неделю, имели более высокую МПК в поясничном отделе позвоночника и лучшие Т-баллы (-1,59±2,70 против -2,17±2,08), чем те, кто не употреблял чай.
Другое исследование, проведенное на Тайване, включавшее широкий возрастной диапазон женщин (от 28 до 70 лет, n=100), сообщило, что потребители чая (сообщенные как «да», «редко» или «нет», типы чая не идентифицированы) имели более высокую МПК бедра, чем не потребители.
Перекрестное исследование с использованием исходных измерений из датского исследования по профилактике остеопороза продемонстрировало положительную корреляцию между количеством
чашек чая, потребляемых в день (типы чая не идентифицированы), и МПК в шейке бедра у женщин в пременопаузе (n = 2016).
В отличие от предыдущих исследований, исследование в Иране измеряло МПК в поясничном отделе позвоночника и бедре у мужчин и женщин в возрасте от 20 до 76 лет. Это исследование показало, что обычное потребление чая (потребление более 5 чашек в день, типы чая не идентифицированы) было связано с улучшением здоровья костей только среди женского населения. Женщины, которые обычно употребляли чай, имели более высокую МПК в бедре, чем не потребители, но при оценке мужчин не было выявлено никакой связи между потреблением чая и МПК.
Исследование пожилых мужчин в возрасте 45-65 лет (n=70) также сообщило об отсутствии связи между приемом чая (сообщается как 1-3 чашки/день, типы чая не определены) и МПК в поясничном отделе позвоночника и бедре.
Потенциальный полоспецифический ответ может указывать на то, что флавоноиды в чае могут действовать через эстроген-опосредованный путь, и это будет подробнее обсуждаться далее.
Проспективные исследования
Результаты проспективных исследований также показали преимущества для здоровья костей у потребителей чая.
Кросс-секционное исследование у австралийских женщин (n=1027) показало, что МПК тазобедренного сустава была на 2,8% выше у тех, кто потреблял чай (1-3 чашек в день) по сравнению с теми, кто этого не делал. Кроме того, 164 из этих женщин наблюдались в течение 4-х лет. У них потеря костной массы была измерена в исходном состоянии (год 1-й) и в конце исследования (год 5-й). Те, кто пил чай - без различия количества или типа чая - имели в среднем потерю 1,6% от общего объема тазобедренного сустава за четыре года, в то время как потребители, не употребляющие чай, потеряли приблизительно 4,0%. Хотя выгоды были найдены, это исследование не включало потребление травяного чая и, следовательно, измерения потребления могут быть значительно выше.
Аналогично исследованиям, проведенным в Австралии и Дании, исследование на Тайване, в котором оценивалось потребление черного, зеленого и улунского чая, обнаружило положительную связь между долгосрочным потреблением чая и МПК. В исследование были включены как мужчины, так и женщины (n=1037) из проспективного исследования хронических заболеваний в городе Тайнань (Тайвань) и помечены привычными потребителями как те, кто потреблял чай по крайней мере один раз в неделю в течение минимум 6 месяцев. Привычные потребители чая были далее классифицированы по продолжительности потребления: 1-5 лет, 6-10 лет и более 10 лет. Была выявлена положительная линейная корреляция между потреблением чая и МПК для всего тела, поясничного отдела позвоночника, шейки бедра и треугольника Уорда. Люди, употреблявшие чай более 10 лет, имели самый высокий уровень МПК среди всех групп, в то время как люди, употреблявшие чай более 6 лет, имели значительно более высокий уровень МПК поясничного отдела позвоночника, чем те, кто не употреблял чай. Когда чай потреблялся менее 5 лет, не было обнаружено никакой существенной связи между потребителями и непотребителями, что говорит о том, что польза может наблюдаться только при более длительном потреблении.
Поскольку преимущества потребления чая обычно чаще выявляются в женской популяции, вполне возможно, что флавоноиды, содержащиеся в чае, ответственны за индуцирование положительных эффектов, наблюдаемых в здоровье костей, действуя как имитаторы эстрогена. В исследовании, проведенном в шотландской популяции, изучался рацион питания женщин в возрасте 45-54 лет (n=3226) и сравнивалось потребление флавоноидов и МПК в поясничном отделе позвоночника и шейке бедра. Большая часть потребления флавоноидов индивидуумом (57%) была отнесена к потреблению чая, в котором средний прием составлял 500-600 мл чая/день. Более высокое потребление флавоноидов, измеренное с помощью опросников частоты приема пищи, было положительно коррелировано с МПК шейки бедра и поясничного отдела позвоночника. Мочевой свободный дезоксипиридинолин, маркер резорбции костной ткани, также отрицательно коррелировал с концентрацией флавоноидов, поддерживая положительную связь между потреблением флавоноидов и более высокой МПК. Результаты этого исследования свидетельствуют о том, что популяции, которые обычно потребляют чай, имеют более высокий уровень флавоноидов в своих системах, и это может снизить оборот костной ткани (полный оборот костной ткани происходит раз в 10 лет) и поддерживать МПК.
Чай и патологические переломы
В то время как МПК является хорошим показателем здоровья костей, известно, что только МПК не может полностью предсказать прочность костей и, в конечном счете, риск патологического перелома у человека. По этой причине важно обсудить исследования, в которых измерялась взаимосвязь между потреблением чая и патологическими переломами. Поскольку проспективные исследования, в которых частота переломов используется в качестве основного результата, требуют значительно больших размеров выборки и часто требуют периода наблюдения в несколько лет, большинство исследований представляют собой исследования типа «случай-контроль» или используют МПК в качестве суррогатной меры риска перелома. Тем не менее, есть несколько проспективных исследований, которые изучали эту взаимосвязь.
Исследования типа «случай-контроль»
Исследование типа «случай-контроль» в Индии (43 случая среди мужчин и 57 женщин соответствовали контрольной группе, средний возраст 65 лет) показало, что потребление чая (менее 1 чашки/день в течение последних 10 лет, типы чая не определены) был связан с более высоким риск��м перелома.
Тем не менее, исследование, проведенное в Северной Италии у женщин в возрасте от 19 до 74 лет (n=279), не выявило никакой связи между переломом и потреблением чая (самоопределние как «пьющая чай» или «не пьющая чай», типы чая не определены).
Аналогично, меньшее исследование, проведенное в Торонто, Канада, в котором были проанализированы женщины (50-84 года) с переломом запястья (n=154) и бедра (n=102) по сравнению с 277 женщинами из контрольной группы, не выявило никакой ассоциации (около 3-х чашек/день, типы чая не определены). Следует отметить, что это исследование определило потребителей чая как тех, кто потребляет более 3 чашек в день, в то время как большинство других исследований определяют потребление чая как 1 порцию или более в день.
Аналогично, исследование из Китая, в котором были изучены пожилые люди (старше 90 лет), не показало никакой связи между потреблением чая (самоопределние как «пьющий чай» или «не пьющий чай», и как нынешний или бывший потребитель чая, типы чая не определены) и остеопоротическими переломами у мужчин или женщин.
Другое исследование из Китая, в котором оценивалась популяция мужчин и женщин (n=581, возраст от 55 до 80 лет), показало отсутствие связи между лицами, потребляющими китайский травяной чай, и риском перелома бедра. Потребители чая были идентифицированы по потреблению не менее 1 чашки в неделю в течение предыдущих 6 месяцев.
Различия в определении того, что представляет собой потребитель чая по сравнению с не потребителем чая, являются сложными при сравнении результатов исследований, поскольку многие исследования имеют различные определения того, кто является потребителем чая. Например, одно исследование определяет потребителя чая как человека, который выпивает не менее 5 чашек в день, в то время как другое исследование указывает, что потребители чая - это те люди, которые потребляют более одной чашки в день.
Риск падения человека - это еще одно соображение при изучении риска переломов. Кросс-секционное исследование пожилых людей (n=2398, ≥55 лет) в Сингапуре показало, что потребление чая (заявленное как ≥1 чашки в неделю, но менее 1 чашки в день, 1-2 чашки в день, 3-5 чашек в день, 6-9 чашек в день и 10 чашек в день) положительно связано с улучшением показателей равновесия, походки, инструментальных действий, таких как использование телефона, отслеживание денег и лекарств; и основных видов деятельности, таких как использование лестницы, одевание и купание. Это важная область для будущих исследований. Рассматривались три основных вида чая: цейлонский/английский чай, китайский черный/улун и зеленый чай.
Проспективные исследования
Четыре проспективных исследования изучали взаимосвязь между потреблением чая и риском патологического перелома. «Инициатива по охране здоровья женщин» в Соединенных Штатах показала, что потребление чая было положительно связано с МПК на определенных участках скелета у женщин в постменопаузе (n=91465). Измеряли МПК позвоночника, тазобедренного
сустава и всего тела. Обычное потребление чая было разделено на следующие категории: менее 1 чашки в день, 1 чашка в день, 2-3 чашки в день или 4 или более чашек в день; травяной чай и чай без кофеина не были включены. Лица, потреблявшие 4 и более чашек в день, имели более высокий общий индекс массы тела по сравнению с контрольной группой, потреблявшей менее 1 чашки в день. Женщины, потреблявшие от 2 до 3 чашек в день, имели значительно более высокий МПК позвоночника по сравнению с теми, кто потреблял менее 1 чашки в день. Кроме того, имелась положительная корреляция между количеством выпитых чашек чая в день и МПК. Хотя потребление чая было положительно связано с МПК, не было никакой связи между количеством выпитых чашек чая и частотой переломов. Переломы включали как те, которые были обнаружены в медицинских записях, так и те, которые были зарегистрированы самостоятельно в течение 4-летнего периода. Поскольку травяные чаи и чаи без кофеина, такие как ройбуш, не были включены, фактическое потребление чая населением может быть недооценено и не выявлять потенциальное воздействие флавоноидов в этих чаях и, следовательно, может изменить их результаты.
Аналогичные результаты были получены в шведской популяции, в которой исследовали большое потребление кофеина и здоровье костей. Поскольку черный чай имеет высокое содержание кофеина по сравнению с другими видами чая, он был включен в это исследование. Это проспективное исследование оценивало риск патологического перелома у женщин в возрасте 40-76 лет (n =31 527) и то, как это связано с их потреблением черного чая и кофе в течение 10-летнего периода. Переломы были идентифицированы по личным больничным записям и включены, если они считались типичными областями остеопоротических переломов, таких как бедро, бедро, таз, позвоночник, дистальное предплечье и проксимальная плечевая кость. Потребление чая разделяли на количество жидкости, потребляемое ежедневно (<1 стакана в день, 1 стакан в день, 2-3 стакана в день, ≥4 стакана в день), и сравнивали с частотой переломов. Достоверных различий в частоте патологических переломов между потребителями чая и непотребителями выявлено не было. Между переломом костей и повышенным потреблением кофеинизированного чая не было выявлено значимой взаимосвязи.
Напротив, в двух краткосрочных проспективных исследованиях (продолжительностью 1 год) сообщалось о более низкой частоте переломов бедра. В исследовании MEDOS, проспективном исследовании продолжительностью 1 год, проведенном в Европе в шести странах, была измерена частота переломов бедра как у мужчин, так и у женщин в возрасте старше 50 лет. При оценке мужчин (n=1762) прием чая был связан со снижением риска перелома бедра, а тип чая не учитывался. Потребление чая, по оценкам, предотвратило 14% переломов у европейских мужчин. Аналогичным образом, европейские женщины (n=5618), которые обычно употребляли чай, также имели более низкую частоту патологических переломов.
Понимание того, почему два краткосрочных проспективных исследования (1 год) показывают снижение риска переломов, связанных с потреблением чая, по сравнению с более долгосрочными исследованиями (4 или 10 лет), является областью для дальнейших исследований. Следует отметить, что в более длительных исследованиях шведской и американской популяций изучались только эффекты черного чая, а также черного и зеленого чая соответственно. Определение потребителей чая как тех, кто потребляет только черный или черный и зеленый чай, может недооценить потребление чая для тех людей, которые потребляют улун и белый чай, которые содержат различные уровни и типы флавоноидов. Кроме того, травяные настои или отвары (например, содержащие ройбуш) или чай без кофеина также способствуют приему флавоноидов. Эта недооценка может привести к потенциальному изменению результатов при сравнении числа переломов у потребителей и непотребителей чая.
Краткое изложение исследований, изучающих потребление чая, минеральную плотность и/или хрупкость костей
Результаты кросс-секционных и проспективных исследований свидетельствуют о том, что потребление чая связано с более высоким уровнем МПК в нескольких местах и что эта взаимосвязь наблюдается у женщин, а не у мужчин.
В настоящее время существует очень мало исследований, которые рассматривают взаимосвязь между потреблением чая и МПК в мужской популяции. Современные исследования показывают, что из-за отсутствия положительного эффекта в МПК у мужчин активные компоненты чая могут действовать как имитаторы эстрогенов. В отличие от женщин после менопаузы, мужчины
производят тестостерон в течение всей своей жизни, и поэтому все еще имеют способность производить эстроген (через ароматазу). Таким образом, присутствие эстрогена означало бы, что флавоноиды, присутствующие в гораздо более низких концентрациях, чем эстроген, должны были бы конкурировать с эстрогеном за связывание с рецепторами эстрогена, с которыми эстрадиол имеет более высокое сродство.
Кроме того, многие исследования с участием мужской популяции рассматривают более молодые популяции, и поэтому отсутствие изменений в МПК может быть результатом дизайна исследования. Поэтому для устранения этого пробела в знаниях следует провести дополнительные исследования, посвященные мужскому населению.
Хотя связь между потреблением чая и МПК была показана во многих исследованиях, связь с патологическим переломом гораздо менее ясна. На сегодняшний день самые крупные и длительные проспективные исследования не показывают связи между потреблением чая и патологическими переломами. Напротив, два проспективных исследования более короткой продолжительности – 1 год - сообщают о более низкой частоте переломов бедра.
Потенциальная путаница во всех обсуждаемых исследованиях заключается в том, что многие различные виды чая (черный, улун, зеленый, белый) или травяные чаи и отвары могут потребляться и значительно варьироваться по своему составу – и не все виды чая обязательно учитываются в анкетах. В частности, содержание кофеина и флавоноидов весьма различно среди различных видов чая. Эти различия могут опосредовать различные биологические эффекты. Кроме того, некоторые исследования просто классифицируют людей как потребителей чая или непотребителей, используя такие ограничения, как “более 1 чашки чая в день”, и это может ослабить потенциальные ассоциации.
Состав чая
Чай из листьев Camellia sinensis (черный, зеленый, улун и белый чай) содержит множество разнообразных флавоноидов, которые помогают обеспечить антиоксидантную, противораковую и антибактериальную активность. Травяные чаи или тизаны, например, сделанные из Aspalathus linearis (rooibos), также могут быть богатым источником флавоноидов. Другие основные компоненты, которые могут модулировать здоровье костей, включают кофеин (но не в ройбуше) и фтор. Содержание кофеина, фтора и флавоноидов может варьироваться из-за различий в вегетационном периоде, месте, возрасте растения и способах его обработки.
Кофеин
Несколько исследований, обобщенных в Таблице 1 (смотри здесь) и Таблице 2 (смотри здесь), были проведены из-за опасений, что высокое потребление кофеина может нанести вред здоровью костей. Кофеин, мочегонное средство, содержится в большинстве видов чая, включая зеленый, улун и черный чай. Только чай ройбуш не содержит кофеина. Черный чай, в частности, содержит самую большую концентрацию кофеина, примерно 61мг/8унций (27мг/100г), но этот уровень значительно меньше, чем аналогичная по размеру порция кофе. Высокое потребление (≥4 чашек кофе в день) напитков с кофеином может быть проблемой для здоровья костей с их способностью вызывать более высокое выведение кальция с мочой, и с этим связана ускоренная потеря костной массы у пожилых женщин.
Исследование в Швеции, которое проводилось с участием женщин в возрасте 40-76 лет в течение 10 лет, показало, что чрезмерное потребление кофеина, равное более чем 300 мг кофеина в день, было связано со значительным увеличением остеопоротических патологических переломов, но объяснило это частично недостаточным потреблением кальция.
В отличие от этого, МПК, оцененная у 580 женщин в постменопаузе на 5 скелетных участках тела, не обнаружила никакой связи между потреблением кофеина (120-480 мг/сут.) и МПК.
Совсем недавнее исследование, в котором были проанализированы данные 38 984 женщин из шведской когорты маммографов, показало, что более высокое потребление кофе не было связано с увеличением частоты переломов. Однако высокое потребление кофеина (≥4 чашек в день) было связано со значительно более низким уровнем МПК поясничного отдела позвоночника (4%), проксимального отдела бедра (2%) и общего объема тела (2%) по сравнению с женщинами, которые потребляли < 1 кофе в день. Эти негативные эффекты, как полагают, частично связаны с более низким, чем рекомендуется, потреблением кальция. Женщины с потреблением кальция приблизительно 745 мг/сут и высоким потреблением кофеина (≥450 мг/сут) имеют более низкий
уровень МПК в позвоночнике и общую МПК. Тем не менее, женщины, достигшие уровня потребления кальция выше 745 мг/сут, не видели влияния кофеина на позвоночник и общую МПК.
В исследованиях на клеточных культурах кофеин снижал образование коллагена, минерализацию, уровень остеокальцина и щелочную фосфотазу в остеобластах цыплят. Аналогичным образом, мезенхимальные стромальные клетки костного мозга крыс, которые дифференцировались в остеобласты, продемонстрировали аналогичное снижение экспрессии щелочной фосфотазы, гена RUNX2 и коллагена 1 после воздействия кофеина. В остеобластах крыс кофеин отрицательно влиял на высвобождение OPG, одновременно усиливая выработку RANKL (система RANKL и OPG осуществляет регуляцию остеокластогенеза). Воздействие кофеина на две линии клеток остеобластов человека также оказывает негативное влияние на формирование костной ткани через снижение экспрессии 1,25-дигидрокси-витамина D3-рецепторов и усиление экспрессии глюкокортикоидных рецепторов. Однако кофеин продемонстрировал положительную модуляцию активности остеокластов путем увеличения их дифференцировки и созревания, о чем свидетельствуют повышенные уровни тартратрезистентной кислой фосфатазы и катепсина К.
Фтор
Фтор, еще один распространенный элемент, содержащийся в чае, может модулировать метаболизм костей. Фтор в основном присутствует в чае из-за воды, используемой для заваривания чайных листьев, и может сильно различаться в разных географических районах.
По сравнению с группой, принимавшей плацебо, женщины, которые потребляли 75 мг/день фтора с 1500 мг/день кальция, имели более высокую МПК в участках с высоким отношением трабекулярной кости к кортикальной. Но МПК был уменьшен в местах, которые содержали большую долю кортикальной кости. Предполагается, что из-за увеличения производства матрикса в трабекулярной кости минерал из кортикальной кости переходит и откладывается в трабекулярной кости, что приводит к снижению кортикальной МПК. Кроме того, на новых участках минерализации в кортикальной кости гидроксиапатит может быть заменен аналогом фтора, что снижает прочность кости. Это было очевидно по значительному увеличению количества переломов позвонков во фторидной группе, что позволяет предположить, что хотя фтор может привести к повышению МПК, это не благоприятно для структуры кости. Несмотря на то, что они были редкими, было опубликовано несколько сообщений об отдельных случаях, когда более высокое потребление чая приводило к фторидным нарушениям в костях. Это происходит из-за того, что уровни потребления фтора на порядки выше, чем у среднего человека, и превышают рекомендуемые нормы потребления. Высокое потребление фтора приводит к образованию кристаллов фторапатита, а не гидроксиапатита в кости. Флюорапатит вреден для здоровья костей, так как приводит к потере костей упругости и прочности на растяжение, что увеличивает вероятность перелома. По данным Всемирной организации здравоохранения, флюороз скелета возникает при уровнях, превышающих 10 мг/л, и поэтому допустимый предел содержания фтора в питьевой воде составляет 1,5 мг/л.
Флавоноиды
Положительная взаимосвязь между потреблением чая и МПК, преобладающая во многих исследованиях (как показано в таблице 1, смотри здесь), может быть связана с присутствием флавоноидов, которые имитируют активность эстрогена. Таким образом, флавоноиды могут также регулировать воспаление и клеточный стресс посредством антиоксидантной активности. Эти эффекты включают снижение апоптоза в остеобластах, которые усиливают активность остеобластов относительно активности остеокластов. Кроме того, флавоноиды могут усиливать выработку минеральных веществ и регулировать костные маркеры, взаимодействуя с остеобластами, одновременно ингибируя активность и/или увеличивая апоптоз в остеокластах.
Эстроген (рис. 1а, смотри здесь) является ключевым модулятором здоровья костей, и его рецепторы (ERα, ERß), чтобы опосредовать биологический эффект, находятся на различных типах клеток. Потеря выработки эстрогенов в период менопаузы тесно связана со значительным снижением МПК и прочности костей, а также повышением риска патологического перелома. Когда субстрат, например гормон, связывается с рецептором эстрогена, они образуют комплекс, который приводит к транслокации рецептора в ядро. Этот новый комплекс предоставляет доступ для связывания ответных элементов, используя белок-активатор (AP1). Связывание элементов эстрогенового ответа позволяет рекрутировать белки, которые могут активировать или подавлять
экспрессию генов. Выявление потенциальных пищевых компонентов – таких как флавоноиды, которые могут связываться с этими рецепторами или влиять на них, может быть полезным для поддержания здоровья костей.
Флавоноиды в изобилии содержатся в чае, а также фруктах и овощах и представляют собой класс химических соединений с несколькими циклическими кольцами (Рис.1, смотри здесь), которые отвечают за добавление вкуса, запаха и цвета к пище и напиткам. Эти соединения можно далее разделить на такие классы, как: флавоны, флавонолы, флаваноны, изофлавоны, катехины, антоцианидины и халоны, которые зависят от функциональных групп, окружающих их кольцевые системы. Флавоноиды становятся все более важными из-за их структурного сходства с гормонами, такими как эстроген, доминирующий гормон, который опосредует оборот костной ткани. Поскольку различные виды чая содержат различные комбинации и уровни флавоноидов, полезно рассмотреть, что известно о каждом типе чая и соответствующих ему флавоноидов.
Зеленый чай
В последние десять лет популярность зеленого чая, изготовленного из листьев Camellia sinensis, возросла и он широко используется в Северной Америке.
Зеленый чай присутствует в широком ассортименте напитков, добавках и различных пищевых продуктов. Этот неферментированный чай содержит кофеин и широко известен благодаря высокому содержанию полифенолов и антиоксидантной способности, а также предлагается в качестве лекарства от многих заболеваний.
Флавоноиды зеленого чая, такие как галлат эпигаллокатехина (ЭГКГ, рис. 1в, смотри здесь), были связаны с более высокой МПК и снижением активности остеокластов. Полифенолы зеленого чая (0,5% в воде), которые давали крысам с хроническим воспалением в течение 12 недель, продемонстрировали значительное увеличение МПК у бедренной кости и значительное снижение тартрат-резистентной кислой фосфатазы и 8-гидрокси-2'-дезоксигуанозина, - оба маркера резорбции кости.
Шестимесячное вмешательство с использованием полифенола зеленого чая и упражнений тайцзи оказалось полезным для группы из 171 женщины в постменопаузе с остеопенией. Прием внутрь полифенолов зеленого чая значительно увеличивает мышечную силу (через 6 месяцев), активность щелочной фосфатазы, а также отношение активности щелочной фосфатазы к активности тартрат-устойчивой кислой фосфатазы (через 3 месяца), демонстрируя положительное влияние на костный обмен. Когда участники употребляли полифенолы зеленого чая в дополнение к участию в тайцзи, они могли поддерживать значительно более высокое отношение активности щелочной фосфатазы к кислой фосфатазе, устойчивой к тартрату, в течение всех 6 месяцев, в дополнение к повышенной мышечной силе.
Черный чай
Черный чай также происходит из листьев Camellia sinensis и составляет самый большой рынок сбыта чая в Северной Америке (Tea Association of USA, 2013). Он в первую очередь известен своей антиоксидантной способностью и содержанием кофеина. Благодаря окислению, которое происходит при производстве чая, черный чай содержит множество различных флавоноидов, таких как теафлавины (рис.1d, смотри здесь). Когда теафлавины сравнивали с катехинами зеленого чая, такими как эпикатехин галлат (ЭКГ) и эпигаллокатехин галлат (ЭГКГ), было показано, что теафлавины одинаково эффективны в качестве антиоксидантов. Поэтому черный чай может быть эффективен в смягчении потери костной массы и содействии здоровому обмену костной массы.
Исследования показали, что введение экстракта черного чая 3-х-месячным овариэктомированным крысам в течение 28 дней продемонстрировало более высокие уровни МПК в правой бедренной кости, грудном ребре и позвонке по сравнению с овариэктомированной группой. Кроме того, крысы, которым давали экстракт черного чая, имели более высокие уровни кальция и фосфора в своих костях по сравнению с овариэктомированными крысами. Это сопровождалось более низкими уровнями кальция, фосфора, креатинина и гидроксипролина в моче.
Вмешательство с экстрактом черного чая (1 мл/100 г массы тела) также было показано для усиления кишечной абсорбции кальция у самок овариэктомированных крыс линии Вистар. Эти крысы демонстрировали значительно более высокий уровень Са2+-активированной АТФазы в двенадцатиперстной кишке, тощей кишке и подвздошной кишке. Кроме того, крысы, получавшие
экстракт черного чая, имели более высокие уровни активности щелочной фосфатазы и кальциевой трансферазы, чем контрольные. Когда овариэктомированные крысы были оценены на гормональный уровень, крысы, получившие экстракт черного чая, почти втрое увеличили уровень 17β-эстрадиола (41,52 пг/мл против 14,81 пг/мл) по сравнению с контролем, без каких-либо существенных различий в паратиреоидном гормоне. Это может быть связано с тем, что флавоноиды, взаимодействуя с рецепторами, повышают выработку 17β-эстрадиола.
Эти результаты противоречат исследованию, которое оценивало 109 польских женщин и сравнивали их потребление чая с их уровнем 17β-эстрадиола. Женщины, потреблявшие больше среднего суточного потребления черного чая (473 мл), имели значительно более низкие уровни 17β-эстрадиола, чем женщины, потреблявшие ниже среднего.
Кроме того, черный чай содержит как теафлавины, так и катехины, которые, как было показано, оказывают ингибирующее действие на CYP19, ароматазу, ответственную за превращение андрогенов в эстрогены. Наиболее интересно, что у крыс, получавших овариэктомию с добавлением эстрадиола (10 мкг/кг массы тела), не было различий в мочевых костных маркерах (кальций, фосфор, гидроксипролин, креатинин) или показателях сыворотки крови (щелочная фосфатаза, активность тартрат-щелочной фосфатазы) по сравнению с крысами, получавшими черный чай. Поскольку экстракт черного чая представляет собой в основном концентрированные полифенолы и у него есть потенциал для повышения уровня эстрогена, обнаруживаемого у овариэктомизированных крыс, вполне вероятно, что флавоноиды способны действовать как антиоксиданты и имитаторы эстрогена и, следовательно, способствуют здоровью костей.
Ройбуш
Ройбуш (Aspalathus linearis), найденный в горных районах Западной Капской провинции южной Африки, также является богатым источником флавоноидов. Ройбуш - это травяной чай или тизан, а не традиционный чай из Camellia sinensis. Растение содержит очень тонкие игольчатые листья, которые можно использовать для неферментированного (зеленый ройбуш) или ферментированного (красный ройбуш) чая ройбуш.
Потенциальная польза для здоровья чая ройбуш представляет особый интерес из-за высокого уровня содержащихся в нем флавоноидов, мощной антиоксидантной активности и недостатка кофеина, который потенциально может поставить под угрозу здоровье костей.
Было показано, что флавоноиды в чае ройбуш нейтрализуют свободные радикалы, делая их желательными для биологических систем. Антиоксидантная активность ройбуша была продемонстрирована на крысиной модели. Крысы, получавшие чай ройбуш, имели пониженное перекисное окисление липидов в присутствии фумонизина, агента свободных радикалов, который способствует развитию рака печени.
Этот сильный антиоксидантный потенциал был поводом для исследования на людях. Среди сорока добровольцев, которые потребляли 6 чашек чая ройбуш ежедневно в течение 6 недель, общие концентрации флавоноидов в плазме пациентов увеличились примерно на 13%, а перекисное окисление липидов снизилось на 58,5 нмоль/мл. Кроме того, отношение восстановленного глутатиона к окисленному глутатиону увеличивалось с потреблением чая ройбуш и поддерживалось после завершения исследования.
Этот факт свидетельствует о том, что чай ройбуш может оказать положительное влияние на здоровье костей благодаря своему антиоксидантному поведению. Поскольку преимущества могут быть опосредованы взаимодействием флавоноидов, важно отметить, что более высокие оценки связаны с более высокими концентрациями флавоноидов. При оценке различных сортов ройбуша по содержанию флавоноидов наблюдались более высокие уровни содержания флавоноидов: аспалатина, изокверцетина, рутина, гиперозида, кверцетин-3-О-робинобиозида у более высокого качества ройбуша.
Содержание флавоноидов также может быть изменено путем ферментации. Анализ ройбуша сравнил концентрации флавоноидов в 100 г ферментированных и неферментированных листьев ройбуша. Количественно определяемые флавоноиды из ройбуша как в ферментированных, так и в неферментированных условиях перечислены в таблице 3 (смотри здесь). Некоторые из основных флавоноидов в ройбуше отсутствуют в других типах чая.
Потенциальные механизмы действия флавоноидов
Противораковая, антибактериальная, противовирусная активность, а также потенциальное влияние на костный метаболизм - все это важные характеристики флавоноидов чая. Биодоступность также является характеристикой для рассмотрения, поскольку флавоноиды должны входить в плазму, чтобы оказывать влияние на внутреннюю среду. Поскольку ройбуш содержит множество флавоноидов, которые в значительной степени уникальны по сравнению с другими чаями, биодоступность флавоноидов ройбуша была оценена путем быстрого ночного приема участниками 500 мл чая ройбуш. Непосредственный анализ плазмы показал, что попасть в плазму после употребления ройбуша может большое разнообразие флавоноидов.
Биодоступность флавоноидов из черного чая, зеленого чая и экстракта зеленого чая была проанализирована после того, как люди потребляли либо 4 пакетика черного чая, либо 3 пакетика зеленого чая, погруженных в 426 мл горячей воды, чтобы соответствовать содержанию ЭГКГ экстракта зеленого чая. Эпигаллокатехин (EGC), эпикатехин (EC), ЭГКГ и ЭКГ были обнаружены в плазме крови после употребления зеленого чая, черного чая и экстракта зеленого чая. Экстракт зеленого чая обеспечивает самый высокий уровень поглощения всех катехинов.
В другом исследовании сравнивалась биодоступность катехинов зеленого чая после употребления либо экстракта зеленого чая (содержит 618 мг ЭКГ, 168 мг эпигаллокатехина и 166 эпикатехина и 77 мг эпикатехина галлата), либо 580 мг очищенного ЭГКГ. С помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии катехины зеленого чая были обнаружены в плазме при максимальной концентрации 3,2 мкм после употребления экстракта чая.
Потребление очищенного ЭГКГ было обнаружено в плазме при 0,5 мкМ. Флавоноиды чая, такие как катехины зеленого чая и теафлавины черного чая, также были обнаружены в тонкой кишке, печени и простате после того, как участники употребляли 284 мл чая (черный, зеленый) 5 раз в день в течение 5 дней. Благодаря своей способности проникать в плазму флавоноиды из чая могут модулировать здоровье костей за счет эстрогеноподобной активности - выступать в качестве антиоксидантов и/или оказывать прямое воздействие на остеобласты, образующие кость, или резорбирующие остеокласты кости.
Действие в качестве антиоксидантов
Активные формы кислорода являются маркером окислительного стресса и высвобождаются остеокластами, чтобы помочь в усвоении минерала и увеличить резорбцию кости. У стареющих самцов крыс Вистар маркеры окислительного стресса увеличивались, а антиоксидантные защитные системы, такие как супероксиддисмутаза, снижались во время старения. Это увеличение окислительного стресса отрицательно коррелировало с МПК в бедренной кости.
Было показано, что окислительный стресс у женщин в постменопаузе (n=135) отрицательно связан с МПК в поясничном отделе позвоночника, бедре, шейке бедра, вертеле и C-телопептиде коллагена 1 типа. Было показано, что антиоксиданты, такие как витамин Е, помогают уменьшить окислительный стресс в окружающей среде и ограничивают резорбцию кости, что приводит к оптимизированному росту кости. В настоящее время понятно, что продукция свободных радикалов может активировать NF-κβ, который активирует резорбцию кости.
При измерении биомаркера окислительного стресса (8-iso-PGF2a) у 101 мужчины и женщины по сравнению с МПК была обнаружена отрицательная линейная связь между 8-iso-PGF2a и общим МПК, а также 8-iso-PGF2a и МПК в поясничном отделе позвоночника. Более того, было показано, что свободные радикалы ингибируют дифференцировку остеобластов; однако этим эффектам можно было бы противодействовать лечением антиоксидантами.
Уровни флавонола положительно коррелируют с антиоксидантным статусом, при этом зеленый чай содержит самые высокие уровни антиоксидантов по сравнению с обычным черным чаем и чаем без кофеина. Потребление 400 мл зеленого чая у людей значительно увеличило антиоксидантную способность уже через 20 минут после приема внутрь по сравнению с контролем.
Несмотря на различия в содержании флавоноидов, как ферментированный, так и неферментированный чай ройбуш имеют высокий уровень антиоксидантной активности. Ферментированный чай дает на 6,6% более высокую антиоксидантную способность в плазме человека, в то время как неферментированный чай увеличивает антиоксидантную способность на 2,9% по сравнению с контролем. Антиоксидантный статус улучшился у участников, которые употребляли ферментированный чай ройбуш в течение шести недель, о чем свидетельствует значительное увеличение снижения уровня глутатиона.
Сравнение антиоксидантной активности в зеленых, улунных, черных, неферментированных, полуферментированных и ферментированных ройбуш-чаях показало, что зеленый чай и неферментированные ройбуш-чаи обладают сходным потенциалом в отношении удаления свободных радикалов с ингибированием 91 и 87% соответственно.
В противоположность этому, другое исследование показало, что черный чай содержал не только более высокую концентрацию флавоноидов (105 мг/г против 68,4 мг/г), но и превосходил чай ройбуша (ферментированный и неферментированный) по антиоксидантной активности.
Более недавнее исследование показало, что 1 мкг/мл экстракта чая ройбуш лучше защищает кардиомиоциты (клетки сердца) от клеточного стресса по сравнению с 50 мкг/мл витамина Е, мощного антиоксиданта. Следовательно, чай ройбуш может иметь преимущества в защите людей от потери костной массы, связанной с окислительным стрессом. Поскольку чай является хорошим источником флавоноидов, а флавоноиды являются сильными антиоксидантами, чай может обеспечить естественный и диетический подход к уменьшению потери костной массы.
Действие на остеобласты
Развитие и активность остеобластов в значительной степени зависят от пути Wnt. Канонический путь Wnt - это один из важнейших молекулярных сигнальных путей, который регулирует эмбриональное развитие и дифференцировку клеток.
После активации канонического пути происходит инактивация инактивирующего комплекса, предотвращая деградацию β-катенина. β-катенин будет переходить из цитоплазмы в ядро, где он может взаимодействовать с факторами транскрипции, связывающимися с Т-клетками, чтобы регулировать продукцию генов, которые способствуют активности остеобластов (то есть активности щелочной фосфатазы, RUNX2). Когда уровни активных форм кислорода повышаются, уровни свободного β-катенина значительно снижаются, так как он связывается с FOX-O транскрипционного фактора, чтобы помочь противодействовать окислительному стрессу. Связывание β-катенина с FOX-O помогает увеличить выработку антиоксидантных ферментов, таких как супероксиддисмутаза, но впоследствии снижает экспрессию генов, участвующих в дифференцировке и пролиферации остеобластов. Склеростин и дисккопф, оба белка-ингибитора пути Wnt, могут связываться с белками, связанными с рецептором липопротеина, инактивировать их и предотвращать путь передачи сигналов Wnt. Это приводит к деградации β-катенина в цитоплазме, необходимой для поддержания подходящего МПК.
Костные морфогенетические белки (КМБ) также имеют решающее значение для развития кости. Посредством связывания КМБ с рецепторами КМБ они могут инициировать активацию белков SMAD (эти белки относятся к семейству белков внутриклеточной сигнализации). Эти SMAD белки будут связываться с коактиваторами в ядре, чтобы увеличить экспрессию маркеров остеобластов. Следовательно, увеличение экспрессии КМБ, как было показано, увеличивает благоприятные маркеры остеобластов, такие как активность щелочной фосфатазы, остеокальцин и ген RUNX2.
Рутин, кверцетин, геспередин и ЭГКГ - это лишь некоторые из флавоноидов, обнаруженных в чае, которые продемонстрировали свою способность положительно влиять на поведение остеобластов за счет повышения минерализации и активности щелочной фосфатазы. Было показано, что эти флавоноиды увеличивают экспрессию транскрипционных факторов (RUNX2 и Sp7), важных для дифференцировки и созревания остеобластов.
Флавоноиды ройбуша ориентин и лютеолин также продемонстрировали способность увеличивать минерализацию в остеобластах человека, повышая активность щелочной фосфатазы и митохондриальную активность клеток, подавляя при этом выработку минеральных ингибиторов склеростина и остеопонтина.
Действие на остеокласты
Дефицит эстрогенов приводит к повышению уровня воспалительных маркеров, которые способны стимулировать дифференцировку остеокластов. Это увеличение маркеров воспаления также сопровождается увеличением продолжительности жизни и количества активных остеокластов.
Мембранный белок RANKL и макрофагальный колониестимулирующий фактор M-CSF - это белки, которые способствуют дифференцировке и активации предшественников остеокластов. Считается, что эстроген уменьшает продолжительность жизни остеокластов, индуцируя апоптоз и
предотвращая вы��вобождение этих стимулирующих белков. Введение эстрогена в костный мозг мышиных клеток приводило к уменьшению количества предшественников остеокластов за счет предотвращения действия М-CSF и RANKL на формирование остеокластов.
Считается, что это происходит из-за того, что эстроген препятствовует передаче сигналов RANKL, что наблюдается при значительном снижении экспрессии RANKL-мишени c-Jun (участвующей в дифференцировке и пролиферации остеокластов) и последующей транскрипции транскрипционного фактора AP-1.
Когда в клетки не был введен эстроген, образование остеокластов продолжалось. Кроме того, образование остеокластов увеличивалось при добавлении RANKL в клеточную культуру. Добавление RANKL также привело к значительному увеличению экспрессии генов c-Jun и AP-1.
Активация ядерного фактора активированных Т-клеток цитоплазмы 1 (NFATc1) необходима для экспрессии генов остеокластов, таких как тартрат-резистентная кислая фосфатаза. Тартрат-резистентная фосфатаза положительно коррелирует с остеокластической дифференцировкой и активностью, и, таким образом, снижение этих генов приводит к значительному снижению остеокластогенеза и резорбции кости. Физетин, флавоноид, найденный в различных растениях, фруктах и овощах, продемонстрировал способность ингибировать активность остеокластов посредством регуляции NFATc1. Подобно физетину, лютеолин, флавоноид, найденный в чае ройбуш, был способен ингибировать активность остеокластов посредством регуляции NFATc1 в дополнение к ингибированию дифференцировки остеокластов с помощью RANKL.
Флавоноиды кверцетин, нарингенин и кемпферол также продемонстрировали способность снижать уровень тартраторезистентной кислой фосфатазы, провоспалительных маркеров, таких как интерлейкин-1, и предотвращать или замедлять резорбцию костной ткани. Это говорит о том, что флавоноиды обладают потенциалом имитировать способность эстрогена положительно влиять на оборот костной ткани, ингибируя дифференцировку и активность остеокластов.
Поэтому привычное употребление чая может обеспечить здоровый, естественный подход к улучшению здоровья костей.
Пробелы в знаниях и будущие исследования
Исследования на людях предоставили убедительные доказательства того, что привычное потребление чая положительно связано с более высоким МПК в нескольких местах скелета, в то время как связь с риском переломов менее ясна. Исследования переломов показывают снижение или отсутствие различий в патологических переломах при употреблении чая. Существуют ключевые вопросы, на которые необходимо ответить в будущих исследованиях, чтобы выяснить, поддерживает ли более высокое потребление чая не только здоровую МПК, но и снижает риск патологических переломов. И если последняя связь предположительно существует, могут быть разработаны и выполнены исследования для выяснения механизмов.
Ключевые пробелы в знаниях следующие:
Тип потребляемого чая. В большинстве исследований, проведенных до настоящего времени, конкретно не оценивался типы употребляемого чая. Это - важная информация, учитывая различные флавоноиды, которые присутствуют в определенных чаях, а также различные уровни флавоноидов в чаях. Принимая во внимание уникальные флавоноиды, присутствующие в чае ройбуш, и тот факт, что он не содержит кофеина, есть захватывающая возможность специально исследовать этот чай из-за его явных отличий от зеленого и черного чая.
Количество потребляемого чая. Количество чая, потребляемого в ходе исследований, не всегда сообщается подробно, т. е. 1-2 чашки в день, 3-4 чашки в день, 1 чашка в неделю. Во многих исследованиях используются пороговые значения выше или ниже определенного уровня потребления, который произвольно устанавливается исследователями. Таким образом, во многих обсуждаемых исследованиях трудно дать последовательное количественное определение потребления чая «обычным» потребителем чая.
Этапы жизни. Многие исследования включают в себя широкий диапазон возрастов. Было бы полезно определить, когда человек испытывает наибольшую потенциальную выгоду. Кроме того, уровни гормонов значительно отличаются у женщин, находящихся в менопаузе, по сравнению с молодыми женщинами. Это может представлять проблему, если флавоноиды имитируют гормоны, которые в настоящее время присутствуют в организме, поскольку они не имеют сродства или уровней, чтобы конкурировать с эстрогенами, чтобы произвести биологический эффект.
Исследования, проведенные на сегодняшний день, показывают, что в целом женщины получают пользу, связанную с их МПК, от привычного употребления чая. Когда мужчины были включены в исследования, этот положительный эффект был в значительной степени утрачен. Однако следует отметить, что по сравнению с непотребителями европейские мужчины продемонстрировали более низкий уровень переломов, когда они обычно употребляли чай. Поскольку очень мало исследований, посвященных мужской популяции, требуются дополнительные исследования, чтобы выяснить и подтвердить любой эффект употребления чая у мужчин.
Биоактивность флавоноидов. Определение биологически активных компонентов чая, которые способствуют улучшению здоровья костей (т.е. более высокая минеральная плотность костей, более низкая частота переломов), важно для лучшего понимания влияния, которое диетические питательные вещества могут оказывать на скелетную систему. Важно оценить, как небольшие изменения в структуре могут положительно влиять на активность остеобластов. Понимание этих взаимодействий может быть полезным для открытий, связанных с биологически активными добавками и лекарственными средствами, поскольку оно может выделить ключевые области и структуры, которые имеют жизненно важное значение для выявления в них биологических изменений.
Механизмы. Необходимо определить, на какие пути влияют активные компоненты чая. Определение таких путей важно для улучшения нашего понимания физиологии костей и того, как потенциальные диетические компоненты могут влиять на них.
Диета. Требуется больше информации, чтобы понять, как потребление пищи с чаем может влиять на биодоступность и биологическую активность флавоноидов чая по сравнению с исследованиями, оценивающими биодоступность и активность флавоноидов после голода (натощак). Потребление пищи с чаем может повлиять на поглощение флавоноидов или через акты синергизма, которые могут помочь увеличить биодоступность, или, наоборот, если пищевые компоненты могут ингибировать поглощение. Выявление этих изменений важно, поскольку потребление пищи с напитком является более реалистичной ситуацией для среднего человека, и многие исследования включают голодание, чтобы изолировать биодоступность флавоноидов, приписываемую только чаю.
Выводы
Привычное потребление чая у женщин в постменопаузе обычно связано с улучшением здоровья костей, о чем свидетельствует более высокая МПК, чем у непотребителей. Как потребление чая приводит к риску патологического перелома требует дальнейшего изучения. Чай содержит высокие концентрации имитаторов эстрогена, известных как флавоноиды, и, как таковые, эти флавоноиды могут действовать как антиоксиданты, повышать активность остеобластов и ингибировать резорбцию кости остеокластами.
Благодарности
L.A. Nash поддерживается канадской аспирантской стипендией Александра Грэма Белла (NSERC).
W.E. Ward выражает признательность за поддержку, предоставленную ей в рамках программы NSERC Discovery Grants для обучения. как пищевые биоактивные вещества модулируют костный метаболизм. W.E. Ward имеет «Канадскую кафедру исследований» (CRC) - это звание, присвоенное некоторым профессорам канадских университетов в рамках Канадской программы научных исследований развития костей и мышц.
Информация о авторах:
1. Департамент медицинских наук, факультет прикладных медицинских наук, Университет Брок, Сент-Катаринс, Онтарио, Канада.
2. Центр здоровья костей и мышц, Университет Брок, Сент-Катаринс, Онтарио, Канада.
3. Кафедра кинезиологии, факультет прикладных медицинских наук, Университет Брок, Сент-Катаринс, Онтарио, Канада.
